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核酸引物是指人工合成的两段寡核苷酸序列，一段与目的基因一端的一条DNA模板链互补，另一段与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。它是DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点，所以引物的纯度关系到PCR扩增的结果，尤其是对用于测序、克隆的引物。因此引物合成之后一般都需要做进一步的纯化。
核酸引物纯化
核酸引物纯化现在引物纯化方式有很多种,目前常见的主要有C18柱脱盐、RPC纯化、ePAGE纯化、PAGE纯化以及HPLC纯化等，各纯化方式对比如下。
纯化方式
纯化特点
C18柱脱盐
对DNA有特异性吸附，可被有机溶液洗脱，但不会被水洗脱，因此能有效地去除盐分，但不能有效去除比目的片段短的小片段。
该方法一般不会对普通PCR反应产生影响。对于需要用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。
RPC纯化
RPC纯化是通过反相净化滤芯 (Reverse Phase Cartridge) 对引物进行纯化，纯化原理与反相HPLC纯化一样。但它是一种有效且更加经济的纯化方式。该纯化方法对引物长度为15～40mer更为适用。RPC纯化的引物可以应用于DNA测序、 PCR及基因合成等。
ePAGE纯化
ePAGE是一种利用快速电泳对引物进行分离纯化的方法，具有通量大，速度快的特点。依靠全自动进样，快速电泳，自动纯化等设备，短时间内完成DNA条带的分离纯化。该纯化方法对<15 mer和>60me的引物不适用。但纯度可满足大多分子生物学实验需求。
PAGE纯化
PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对引物DNA进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA。PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法，纯化后的DNA纯度大于90%，对长链Oligo DNA (大于50mer)的纯化特别有效。
HPLC纯化
HPLC纯化是利用高效液相色谱的原理，对引物DNA进行纯化。该方法能达到很高的纯度和灵敏度。该法的缺点是成本较高，批量生产效率不高。HPLC纯化主要用于短链和修饰引物的纯化。
在使用HPLC方法对引物DNA的分析和纯化中，常用的有离子交换（ion-exchange）HPLC和反相HPLC。反相HPLC一般纯度能大于90%；离子交换 HPLC纯度能大于95%，并且可以有效的去除N-1短片段，对纯化短链引物＜15mer特别有效。
依利特最近推出的核酸纯化系统，是一套多功能制备系统，流量范围可达100mL/min，同时具备双波长检测功能，可实现进样和收集同时进行，兼容多种规格托盘和试管。与之相匹配的SinoPak BEH T-C18 反相色谱柱以及Bioassist 阴离子交换柱，纯化效率高，色谱柱寿命长，是核酸纯化的不二之选。
核酸引物纯度检测
纯化完成后，引物纯度检测也是必备的一个步骤。HPLC是最常用的一种分析方法，参考国标GB/T 34797-2017，核酸引物纯度的分析色谱条件如下：
色谱柱：
SinoPak BEH AQ-C18 色谱柱 3μm 4.6*50mm
流动相：A：0.1mol/L TEAA；B：乙腈，梯度洗脱
0-15min 流动相B从5%到30%
检测波长：260nm
流速：1.0mL/min
柱温：60℃
SinoPak BEH AQ-C18色谱柱是依利特最新研发并推出的全新一代杂化硅胶色谱柱，通过特殊的三键键合工艺，极大降低键合相脱落。该色谱柱不但可以耐纯水，在具备高的柱效和机械强度的同时，还具有很宽pH范围稳定性，即使在极端的条件下，也能保持很好的柱寿命。SinoPak BEH AQ-C18色谱柱有三种不同的孔径[130Å、200Å和300Å] ，适用于从小分子分析到大分子生物制药分析的各类应用。
分析纯化系统配置如下
序号
主要参数
1
P3170
高压恒流泵
流速范围：0.01~100.00mL/min
耐压：30MPa
2
UV3150
双波长紫外-
可见检测器
分析型：10mm
半制备型：2mm
制备型：0.5~2mm可调
3
S3150PF
自动进馏器
进样范围：10μL~20mL（最大可达25mL）
强制、时间、阈值、斜率等多种收集模式
4
TP3100溶剂托盘
/
5
Kromstation
色谱数据工作站
可对仪器进行全反控
6
Bioassist Q
分析型
阴离子交换柱
10µm 4.6×50mm
Bioassist Q
制备型
阴离子交换柱
13µm 10×100mm
SinoPak BEH AQ-C18
3µm 4.6×50mm （分析型）
SinoPak BEH AQ-C18
5µm 10×250mm （制备型）
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周一至周日 8:30-17:30
（仅收市话费）
