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甘蔗皮渣中对香豆酸检测解决方案
2022-07-22 09:20

1.前言

香豆酸具有广泛的药理作用,预防心血管疾病、抗氧化、抗菌消炎、保护心脏、利肝利胆、及抗病毒等功效。因此,对香豆酸广泛应用于食品、化妆品、医药等领域。

而针对甘蔗皮渣中的对香豆酸检测,由于不同产地、不同品种的甘蔗皮中活性成分的类型、含量均存在差异,因此,建立甘蔗皮中对香豆酸的高效液相色谱定性定量检测方法对于农副产品中对香豆酸的质量控制非常重要。即将实施的“GB/T 40833-2021甘蔗皮渣中对香豆酸检测方法高效液相色谱法”标准中给出了甘蔗皮渣中的对香豆酸的样品预处理和HPLC分析测试方法。

依利特使用最新推出的EClassical 3200液相色谱仪和经典的Supersil ODS2色谱柱,为甘蔗皮渣中对香豆酸检测提出了分析检测解决方案,供相关人员参考使用。


2.仪器设备与试剂


表2-1  饮料中的山梨酸含量检测HPLC系统标准配置


表2-2 前处理所需设备


表2-3 前处理及样品分析所需试剂

实验过程中其它玻璃器皿及耗材还包括棕色容量瓶(10mL、25mL、100mL)、烧杯(10mL、100mL)、圆底烧瓶(25mL、100mL)、量筒(25mL)、抽滤瓶(125mL+抽滤漏斗)、中速定量滤纸、0.45μm针筒式水相过滤器、玻璃棒、50mL塑料离心管、一次性塑料滴管、一次性PVC手套、一次性口罩等。


3.甘蔗皮渣中对香豆酸检测

3.1 样品制备

3.1.1 甘蔗皮渣粉末,置于80℃烘箱中烘干2小时,保存待用。

3.1.2 称取0.20g(精确至0.01g)甘蔗皮渣样品和梭形转子一同放入25mL圆底烧瓶中,移取10mL 2mol/L氢氧化钠溶液,轻轻摇晃使样品和溶剂混合均匀,调节磁力搅拌器使转子能够带动溶液在室温下充分搅拌6h。

3.1.3 取下圆底烧瓶将溶液倒入放有两层中速定量滤纸的抽滤装置中,过滤,取5mL 2mol/L氢氧化钠溶液分三次加入圆底烧瓶中冲洗内壁,洗液全部倒入抽滤装置中,摇匀。

3.1.4 将滤液倒入100mL烧杯中,用少量(2mL)纯水溶液清洗抽滤瓶,洗液并入烧杯中。移取4.0mL 6mol/L盐酸溶液充分摇匀后再逐滴加入6mol/L盐酸溶液调节PH至2.0左右,用少量(1mL)纯水冲洗PH计电极,洗液并入烧杯中。

3.1.5 将上述酸性溶液转入25mL棕色容量瓶中,加水定容至刻度,混匀后以8000r/min的转速离心5min,取部分溶液用0.45μm针筒式水相过滤器过滤,即为试样液,待测。

3.2 标准曲线的制作

对香豆酸标准储备液(1.0mg/mL):准确称取对香豆酸对照品25mg(精确至0.1mg)于25mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,配制成浓度为1.0mg/mL的标准品储备液,放置于4℃冰箱避光保存,有效期为1个月。

对香豆酸系列标准工作液:准确移取对香豆酸标准储备液(1.0mg/mL)40μL、0.20mL、0.80mL、1.00mL、4.00mL、8.00mL、10.00mL至10mL容量瓶中,用甲醇定容并摇匀。该校准系列浓度分别为4.0μg/mL、20.0μg/mL、80.0μg/mL、100μg/mL、400μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL临用时配制。

3.3  色谱条件

流动相:A:甲醇 B:0.1%乙酸水溶液


色谱柱:Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm

流量:1.0mL/min

检测波长:254nm

进样体积:10μL

柱温:30℃


4.测试(实验)结果

4.1 标准曲线配制与线性相关系数

参照3.2方法将标准系列工作液分别注入10 μL于液相色谱仪中。测定相应的保留时间和峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。


图4-1  对香豆酸标准曲线

对香豆酸标准曲线方程:y=7.5504x+12.556,R2=0.9999

4.2 样品液相色谱分析结果

按照3.1和3.2分析方法,分析制备好的样品和标准品溶液,结果如下:


图4-2 对香豆酸标准品色谱图(浓度:1000μg/mL)


图4-3 样品典型色谱图表

4-1 样品色谱图数据


通过计算得到样品中对香豆酸含量为39.29g/kg。

4.3 连续进样数据


4.4 加标回收率及检出限验证

准确在三份0.2g样品中分别加入0.5mL、1.0mL、1.5mL1000μg/mL对香豆酸标准品溶液,对应0.20g样品称样量加标量分别为2.5g/kg、5.0g/kg、7.5g/kg,后续与样品制备过程相同,以样品为本底值分别计算得到的回收率如下:


表4-2 3份样品加标回收率

参考基线噪声:5×10-5V,4.0μg/mL对照品峰高为2.80mV。以3倍和10倍基线噪声信号确定仪器检出限和定量限,甘蔗皮渣试样称取量为0.2002g,计算方法检出限和定量限,结果如下:


表4-3 检出限和定量限结果


5.结论

本实验按照标准“GB/T 40833-2021甘蔗皮渣中对香豆酸检测方法高效液相色谱法”对甘蔗皮渣中对香豆酸进行分析检测,并对该方法进行了系统验证。测试结果数据符合标准要求。验证结果表明:该系统稳定性良好,定量结果准确。




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