液相色谱柱是高效液相 HPLC 分析系统的核心部件，C18 反相色谱柱、BDS 宽 pH 色谱柱等主流填料直接决定实验数据准确度与色谱柱使用寿命。规范掌握色谱柱使用方法、做好日常维护保养，可有效规避盐析堵柱、柱压升高、峰形拖尾、填料塌陷等各类液相常见故障，保障药品、食品、环境、中药等各类检测场景下分析结果稳定可靠。本文结合依利特色谱柱实操经验，全面讲解新柱活化、流动相配制、样品预处理、分类型色谱柱保存、再生冲洗流程以及柱压异常全套解决方案，是实验室液相操作人员必备实操参考文档。

一、液相色谱柱正确使用规范｜新柱活化、流动相、样品处理要点

1.1 新色谱柱使用前怎么平衡？如何避免盐析堵柱

全新液相色谱柱内部填充出厂指定储存液，上机前必须核对储存液与实验流动相是否互溶，严禁不做过渡直接切换溶剂。

若采用反相色谱体系，流动相含高浓度盐、缓冲盐体系时，需先用 10% 低浓度有机相洗脱剂做梯度过渡，盐分直接接触填料极易产生盐析结晶，堵塞柱头筛板，造成柱压飙升。

1.2 流动相配制标准与 pH 适配要求

配制 HPLC 流动相需选用色谱纯有机溶剂搭配超纯水；含盐缓冲流动相必须通过 0.45 μm 滤膜减压过滤，定期清洗流动相储液瓶、管路在线过滤器，减少固体颗粒进入色谱柱造成污染。

常规硅胶基质键合 C18 色谱柱适用 pH 区间为 2.0-8.0；针对碱性化合物检测，推荐选用 BDS C18 填料色谱柱，耐受 pH 2.0-10.0 宽范围。若在 pH 临界极值条件下完成检测，实验结束后必须立刻清洗色谱柱，防止固定相水解损伤。

1.3 样品预处理与保护柱使用技巧

所有待测样品上机前均需经过样品过滤器或固相萃取 SPE 预处理，去除蛋白、油脂、固体杂质；基质复杂、高污染样品建议搭配色谱保护柱，拦截杂质，延长分析柱使用寿命。

正相色谱体系有特殊要求：全部实验溶剂、待测样品必须严格脱水，微量水分会直接破坏正相填料选择性，导致保留时间漂移、分离度变差。

表 1：色谱柱使用关键要点

二、不同类型色谱柱日常清洗与长期保存方法（反相 / 正相 / 离子交换）

2.1 使用缓冲盐流动相后日常冲洗流程

只要实验过程用到缓冲液、含盐流动相，停机前必须执行两步冲洗：

第一步：10% 甲醇 / 水溶液持续冲洗色谱柱 30 分钟，彻底洗脱柱内残留盐分，防止结晶；

第二步：更换纯甲醇持续冲洗 30 分钟，完成柱内溶剂置换。

核心禁忌：禁止纯水长时间冲洗色谱柱，纯水会破坏键合相填料结构，造成填料塌陷、柱效永久下降。

2.2 色谱柱长期存放规范（分柱型差异化保存）

实验结束长期不使用色谱柱，需根据填料类型选择对应保存溶剂，封堵原装堵头，室温避光存放：

反相色谱柱（C18、BDS C18 等）：浸泡纯甲醇或纯乙腈；

正相色谱柱（硅胶、氨基、氰基柱）：储存于完全脱水纯正己烷；

离子交换色谱柱：存放于添加叠氮化钠的水溶液中，抑制微生物滋生。

表 2：色谱柱保存规范

三、反相 / 正相色谱柱再生完整操作步骤，恢复柱效

长期反复进样后，杂质吸附在填料表面会出现峰拖尾、分离度下降、柱效降低问题，可采用溶剂梯度冲洗再生色谱柱，冲洗溶剂总量控制在 20-30 倍柱体积。

3.1 反相色谱柱再生冲洗顺序

正向冲洗流程：10:90 甲醇水溶液 → 纯乙腈 → 异丙醇；

正向冲洗完成后反向冲洗：异丙醇 → 纯乙腈 → 10:90 甲醇水溶液，高低极性溶剂交替洗脱吸附有机物杂质。

3.2 正相色谱柱再生冲洗顺序

正向冲洗流程：正己烷 → 异丙醇 → 二氯甲烷 → 甲醇；

正向冲洗完成后反向冲洗：甲醇 → 二氯甲烷 → 异丙醇 → 正己烷；

重点要求：正相再生全部溶剂必须严格脱水，水分会不可逆破坏正相填料。

表 3：色谱柱再生流程

四、液相色谱柱柱压异常升高原因及全套解决方案

液相运行过程中柱压突然升高、压力持续居高不下，是实验室常见故障，主要分为筛板堵塞、填料污染、盐结晶、pH 腐蚀四大诱因，对应处理方案如下：

筛板堵塞：可反向冲洗色谱柱缓解堵塞；堵塞严重时拆卸柱头筛板，10% 稀硝酸超声 10 分钟，纯水二次超声 10 分钟，晾干重装；

填料表层污染：拆除柱头，更换前端被杂质污染的填料，复原装填；

盐结晶堵塞：先用 10% 甲醇 / 水低速冲洗溶解盐分结晶，结晶完全清除后更换高浓度甲醇冲洗；

pH 使用超出色谱柱耐受范围：固定相水解受损无修复办法，日常严格控制流动相 pH 区间，提前规避损耗。

表 4：柱压异常升高问题处理

五、色谱柱保养高频问答 FAQ

Q1：新 BDS C18 色谱柱可以直接进高盐缓冲液样品吗？

A：不可以。无论普通 C18 还是 BDS 宽 pH 色谱柱，高盐流动相均需要 10% 甲醇水低有机相过渡，防止盐析堵塞柱头筛板。

Q2：用完缓冲盐流动相，直接用纯甲醇封存色谱柱会损坏吗？

A：会造成盐分结晶堵柱。必须先用 10% 甲醇水冲洗 30 分钟除净盐分，再使用纯甲醇冲洗保存。

Q3：BDS C18 色谱柱 pH 耐受范围是多少，适合检测碱性样品吗？

A：BDS C18 色谱柱 pH 耐受区间 2.0-10.0，普通硅胶 C18 仅 2.0-8.0，碱性化合物检测优先选用 BDS C18 色谱柱，减少峰拖尾。

Q4：色谱柱压力升高，反冲是否能解决堵塞问题？

A：筛板堵塞可通过反冲临时缓解，重度堵塞需拆卸筛板超声清洗；若因 pH 腐蚀填料导致柱压升高，色谱柱无法修复。

Q5：反相色谱柱长期闲置，保存选用甲醇还是乙腈？

A：纯甲醇、纯乙腈均可，密封原装堵头室温存放，严禁纯水浸泡，避免填料塌陷。

液相色谱柱使用寿命与分析稳定性完全依靠标准化使用和定期维护。上机前做好溶剂过渡、样品预处理；实验后区分含盐 / 无盐流动相执行差异化冲洗；长期闲置按柱型选择专用保存溶剂；柱效下降及时开展再生冲洗；出现柱压异常快速定位堵塞根源。规范操作依利特色谱柱，既能降低耗材采购成本，也能持续保证药物检测、食品农残、水质环境、中药提取等各类液相检测数据精准稳定。