在液相色谱（HPLC）分析工作中，系统压力的稳定性直接关乎实验结果的准确性、重复性，更影响分析效率与仪器使用寿命。不少实验室操作人员都曾遭遇过压力忽高忽低、骤升骤降或持续异常的问题，不仅打乱实验节奏，还可能导致色谱柱损坏、样品报废等额外损失。本文结合实操经验，全面剖析液相压力异常的核心原因，补充关键排查要点，并给出可落地的解决方案与维护建议，助力实验室高效解决压力难题。

一、液相压力变低的常见原因及隐形诱因

1. 流动相问题

流动相中有气泡：除常规超声脱气不充分外，环境温度骤升导致溶剂中溶解气体析出，或流动相放置时间过长滋生微生物，也会引发气泡问题，进而导致压力偏低且波动。

溶剂过滤器堵塞或流动相不足：溶剂过滤器长期未更换易被杂质堵塞，而流动相瓶内导管未浸没、导管老化开裂进气，同样会造成泵吸液不足，压力下降。

流动相比例或组成发生变化：梯度洗脱时比例阀故障、手动混合流动相时混合不均，或流动相组分挥发（如甲醇、乙腈等易挥发溶剂），都会导致流动相实际比例偏离设定值，引发压力异常降低。

2. 泵系统问题

单向阀堵塞或损坏：单向阀内残留的样品杂质、流动相结晶（如缓冲盐溶液未及时冲洗）会导致阀芯卡滞，无法正常闭合，泵输出压力不足。

密封圈老化或磨损：长期使用后密封圈弹性下降，出现渗漏，不仅降低压力，还可能污染流动相，影响实验结果。

泵头内有气泡：泵头排气不彻底、流动相脱气不充分，或更换流动相时未及时排空泵头内空气，都会导致泵输出压力不稳定且偏低。

3. 管路连接问题

管路接头松动或漏液：接头长期拆卸导致磨损、密封圈丢失，或连接时未拧紧，都会造成流动相渗漏，压力下降；漏液严重时还可能污染实验室环境。

管路堵塞或存在死体积：管路弯折、内壁残留样品杂质导致部分堵塞，或管路连接不当形成死体积，会阻碍流动相顺畅通过，局部压力异常，整体表现为系统压力偏低。

表1.液相压力变低原因与解决方案对照表

相关产品推荐：液相色谱仪 液相色谱泵

二、液相压力越来越高的原因及致命影响

1. 色谱柱问题

色谱柱堵塞（样品残留、颗粒物堆积）：样品未经过0.22μm滤膜过滤、流动相杂质未去除，或分析含蛋白质、多糖等大分子样品时未做衍生处理，都会导致杂质在色谱柱内堆积，柱压逐步升高；长期堵塞会造成柱效下降，甚至无法恢复。

柱床塌陷或填料变质：色谱柱反接使用、压力骤变（如突然停泵、切换流动相过快）会导致柱床塌陷；流动相选择不当（如使用与填料不兼容的溶剂）、保存环境不当（如潮湿、高温）会导致填料变质，两者均会引发柱压升高。

柱温过低导致流动相黏度增加：柱温低于设定值，或柱温箱故障导致温度波动，会使流动相黏度上升，流经色谱柱的阻力增大，压力随之升高；同时还会影响分离效果，导致峰形拖尾、保留时间漂移。

2. 过滤系统问题

在线过滤器堵塞：在线过滤器是保护色谱柱的关键部件，长期使用后截留的杂质会堵塞滤膜，导致系统压力持续升高，需定期拆卸清洗或更换。

保护柱或预柱饱和：保护柱/预柱长期未更换，截留的杂质达到饱和状态，无法继续过滤，不仅会导致压力升高，还会失去保护作用，使杂质进入分析柱。

进样器转子密封垫堵塞：进样过程中样品残留、流动相结晶会堵塞密封垫缝隙，导致进样口压力升高，还可能影响进样准确性，出现鬼峰、峰面积重现性差等问题。

3. 操作条件问题

流速设置过高：流速超过色谱柱大耐受范围，或高于仪器泵的额定输出流速，会导致系统压力急剧升高，长期高流速运行还会损伤色谱柱和泵部件。

梯度洗脱过程中溶剂黏度变化：梯度洗脱时，不同溶剂混合比例变化会导致流动相黏度突变（如甲醇-水体系在某一比例下黏度达到峰值），若未提前预判并调整梯度程序，会导致压力骤升。

样品过载或样品基质复杂：进样量过大导致样品过载，或样品基质中含有大量干扰杂质，会加剧色谱柱负担，导致柱压升高，同时出现峰形展宽、分裂等问题。

表2.液相压力升高原因与解决方案对照表

三、液相压力一直变化及波动大的原因及排查难点

1. 泵工作不稳定

柱塞杆或密封圈磨损：柱塞杆长期往复运动导致磨损，或密封圈老化，会导致泵吸液和排液不顺畅，压力波动明显；磨损严重时还会出现漏液现象。

泵头内存在气泡：泵头内气泡未彻底排出，会导致泵输出流量不稳定，压力随之波动；尤其在低流速分析时，波动更为明显。

溶剂混合不均匀：二元泵、四元泵的比例阀故障，或流动相混合时未充分搅拌，会导致混合后的流动相组成不均，流经色谱柱时压力出现波动。

2. 环境因素影响

实验室温度波动大：实验室未配备恒温设备，或空调出风口直吹仪器，会导致流动相温度、色谱柱温度波动，进而影响流动相黏度和柱内阻力，压力随之变化。

未使用脱气机或脱气效果不佳：流动相中溶解的气体未彻底去除，在系统压力变化时会析出气泡，气泡的产生与破裂会导致压力剧烈波动；尤其在梯度洗脱时，脱气不充分的影响更为显著。

电源电压不稳定：实验室电源电压波动过大，会影响泵、柱温箱等仪器部件的正常工作，导致泵输出压力不稳定，进而引发系统压力波动。

3. 系统综合问题

多部件同时轻微故障：系统中多个部件（如单向阀轻微堵塞、管路接头轻微渗漏、保护柱轻度污染）同时出现轻微故障，单独排查时难以发现问题，但组合在一起会导致压力持续波动。

系统未充分平衡：更换流动相、色谱柱后，未给予足够的平衡时间，系统压力未稳定就开始进样分析，会导致压力在分析过程中持续变化，同时影响分离效果。

软件控制参数设置不当：梯度程序设置不合理、流速 ramp 时间过短，或压力上限/下限设置不当，会导致仪器在运行过程中频繁调整输出，引发压力波动。

表3.液相压力波动大原因与解决方案对照表

四、解决压力问题的实用建议及进阶技巧

1. 日常维护措施（细化补充）

定期更换关键部件：建议根据仪器使用频率制定更换周期（如高频使用时，密封圈每3-6个月更换一次，过滤白头每月检查更换，保护柱每100-200次进样更换）；更换后做好记录，便于追溯。

充分脱气：优先使用在线脱气机，确保脱气效果；若使用超声脱气，需注意超声时间（一般15-20分钟），超声后静置片刻再使用，避免气泡再次混入；缓冲盐溶液需现配现用，减少气体溶解。

严格样品前处理：所有样品、流动相均需通过0.22μm（反相色谱）或0.45μm（正相色谱）滤膜过滤；分析生物样品、环境样品等复杂基质样品时，需增加预处理步骤（如固相萃取、液液萃取），去除干扰杂质。

正确保存色谱柱：使用后需用兼容溶剂冲洗色谱柱（如反相柱用甲醇或乙腈冲洗），去除柱内残留杂质；长期保存时，需将色谱柱两端封死，置于阴凉干燥处，避免柱床干涸、填料变质。

定期清洁仪器部件：每周清洁进样器、管路接头，每月拆卸清洗在线过滤器，避免杂质堆积；清洁时使用兼容的溶剂（如甲醇、异丙醇），避免损伤部件。

2. 故障排查流程（分步详解）

记录基线数据：排查前先记录正常状态下的系统压力基线（如流速1.0mL/min时的压力值），作为对比基准；同时记录压力波动的幅度、频率，以及是否与进样、梯度洗脱等操作同步。

分段检查系统压力：将系统拆分为泵出口、在线过滤器、保护柱、分析柱、检测器等多个区段，逐一断开连接，测定每个区段的压力值，定位压力异常的具体区段。

从泵开始逐步向后排查：先关闭泵出口管路，启动泵，观察泵的输出压力是否稳定；若泵压力异常，排查泵头气泡、单向阀、密封圈等部件；若泵压力正常，依次检查后续管路、过滤系统、色谱柱等。

更换怀疑部件进行测试：针对排查出的可疑部件（如堵塞的在线过滤器、污染的保护柱），更换为新部件或已知正常的部件，观察压力是否恢复稳定，验证故障原因。

总结排查经验：将故障现象、排查过程、解决方案、更换部件等信息整理归档，建立故障排查手册，便于后续遇到类似问题时快速解决。

3. 专业维护提示（进阶指导）

建立系统压力基线记录：每天开机后，在相同的流速、流动相、柱温条件下，记录系统压力基线，形成压力变化趋势图；若发现压力偏离基线超过5%，及时排查原因，避免小故障扩大。

定期进行预防性维护：制定季度、年度预防性维护计划，季度维护包括全面清洁仪器、检查管路磨损情况、校准柱温箱温度等；年度维护可联系仪器厂家工程师，进行泵精度校准、检测器性能检测等深度维护。

培训操作人员规范使用：定期组织操作人员培训，讲解仪器工作原理、压力异常的危害、正确的操作流程及维护方法；避免因操作不当（如野蛮拆卸管路、未冲洗色谱柱就停机）导致的压力问题。

合理选择流动相和色谱柱：根据样品性质选择兼容的流动相和色谱柱，避免使用会导致填料变质的溶剂；使用缓冲盐流动相时，需注意pH值范围，避免缓冲盐结晶堵塞管路和色谱柱。

应对特殊场景的压力问题：分析高黏度样品时，可适当提高柱温、降低流速，减少压力升高的风险；梯度洗脱时，优化梯度程序，避免流动相黏度突变区间的流速过快。

表4.日常维护与故障排查核心表格

五、压力异常的潜在风险与规避价值

很多实验室操作人员容易忽视轻微的压力波动，认为不影响峰形就无需处理。但实际上，压力异常背后往往隐藏着仪器部件磨损、污染等问题，若长期忽视，可能引发一系列连锁反应：轻则导致保留时间漂移、峰面积重现性差，影响实验结果的准确性，增加数据处理难度；重则造成色谱柱永久性损坏、泵部件故障，增加仪器维修成本，甚至导致实验中断，影响项目进度。

通过规范日常操作、定期维护仪器、快速排查压力故障，不仅能保障实验的顺利进行，还能延长仪器使用寿命、降低耗材消耗成本、提高实验效率。对于科研实验室、质检机构等对实验结果要求严格的场景，稳定的系统压力更是保障数据可靠性、提升实验室公信力的关键。

液相色谱系统压力异常并非难以解决的难题，核心在于精准定位故障原因、规范落实维护措施。通过本文总结的压力异常原因、排查流程及维护建议，希望能帮助实验室操作人员快速解决压力忽高忽低等问题，提升仪器操作与维护水平。若在实际操作中遇到复杂的压力故障，可联系仪器厂家技术支持，或与同行交流经验，及时规避实验风险，保障分析工作的高效、精准开展。

常见问题解答（FAQ）

Q1：开机后系统压力持续波动，但未出现漏液，可能是什么原因？

A：这种情况大概率是系统内存在气泡或溶剂混合不均匀导致的。首先检查流动相脱气是否充分，可重新对流动相进行超声脱气或开启在线脱气机延长脱气时间；其次排查泵头是否存在气泡，通过手动排气功能彻底排空泵头内空气；若为梯度洗脱模式，需确认比例阀工作正常，可尝试手动混合流动相后进行等度洗脱测试，观察压力是否稳定。

Q2：压力升高后，更换了保护柱和在线过滤器，压力仍未恢复正常，该怎么办？

A：此时应重点排查分析柱和管路。先断开分析柱入口端，启动泵测定前段管路压力，若压力正常，说明问题出在分析柱；可尝试用兼容的溶剂（如反相柱用甲醇-水=90:10）进行反向冲洗，若冲洗后压力仍高，可能是柱床塌陷或填料变质，需更换分析柱。若前段管路压力仍高，需检查管路是否弯折、内壁是否有残留杂质，可拆卸管路用甲醇或异丙醇冲洗，必要时更换新管路。

Q3：同一套系统，分析不同样品时压力波动幅度差异大，是什么原因？

A：这主要与样品基质复杂度和前处理效果有关。若分析的样品基质复杂（如生物样品、环境水样），且未经过充分预处理，样品中的大分子杂质、颗粒物会快速堵塞过滤系统和色谱柱，导致压力波动加剧；而纯净样品对系统的污染较小，压力相对稳定。此外，样品黏度差异也会影响压力，高黏度样品流经色谱柱时阻力变化更大，易出现压力波动。建议针对复杂基质样品优化前处理流程，增加固相萃取、离心等步骤，确保样品过滤彻底。

相关文章推荐：

高效液相色谱仪压力范围及影响因素

液相色谱仪开机压力异常？咱们实验人都该懂的排查与解决办法

HPLC 输液泵故障诊断与排除指南：快速解决压力异常、漏液等问题​