维生素D（VD）是维持人体钙磷代谢平衡的关键营养素，其缺乏可导致儿童佝偻病和成人骨质软化症。食品中VD主要以VD2（麦角钙化醇）和VD3（胆钙化醇）形式存在，两者结构高度相似（仅侧链双键位置不同），传统HPLC（一维）难以实现完全分离，易导致定量误差。本文基于EClassical 3200 HPLC/3200L UHPLC构建二维液相色谱系统（2D-LC），结合GB 5009.296-2023《食品安全国家标准 食品中维生素D的测定》（第二法）要求，实现对食品中VD2和VD3的高效、精准检测。

2D-LC，突破传统HPLC（一维）分离瓶颈

与传统HPLC的对比

工作流程

测定维生素D的2D-LC流程如下图所示。利用KromStation色谱工作站实现系统自动化分析。

流程说明：

① 除杂质：样品进入一维柱，非目标组分排至废液

② 富集：阀切换至富集柱，捕获目标VD组分。

③ 分析：目标组分转移至二维柱，实现VD2/VD3分离。

方法优势

在线净化：一维柱可充当净化柱，去除蛋白质和脂质，替代繁琐的液液萃取/固相萃取。

中心切割技术：精准转移目标窗口（20.2–21.5 min），避免非目标组分干扰。

自动化分析：KromStation色谱工作站控制下，通过切换阀自动完成富集、转移与分离，减少人为误差。

色谱条件

方法性能验证

分离效果

2D-LC的一维中仅出现一个VD峰，表明VD2 与VD3并没有被分开；而在二维中，VD2和VD3的色谱峰有着良好的基线分离。

VD一维色谱图

VD二维色谱图（两个色谱峰分别为VD2 与VD3）

方法精密度（n=7）

与国标 GB 5009.296-2023的符合性分析

GB 5009.296-2023 第二法“在线柱切换-二维液相色谱法”明确要求：

_{1、需采用二维色谱系统实现VD2与VD3的分离，分离度≥1.5。}

2、方法精密度（RSD）应≤5%。

3、需具备在线净化与富集功能，减少前处理误差。

依利特方案完全满足上述要求。

1、分离度（1.809~2.121）优于国标阈值，确保定性准确性。

2、保留时间与峰面积 RSD 均低于国标限值，重复性稳定。

3、在线阀切换与富集功能符合标准中“自动化净化”要求，与国标规定的技术路线一致。

结论

_{依利特二维液相色谱系统成功解决了食品基质中VD2/VD3同分异构体的分离难题。该方案在婴幼儿配方食品、乳制品等VD强化食品检测中具有重要应用价值，为食品安全监管提供可靠技术支撑。}