依利特科技分析实验室依据2025版《中国药典》 中《乙胺利福异烟片》质量标准，使用EClassical 3200L高效液相色谱系统，对利福平有关物质及异烟肼、盐酸乙胺丁醇含量测定进行了方法学验证。结果表明，依利特HPLC系统和相关色谱柱中完全满足药典的严格要求，为抗结核复方制剂的质量控制提供可靠的技术支撑。

一、有关物质测定

利福平是抗结核治疗的一线药物，但其光降解产物（醌式利福平）、氧化产物（N-氧化利福平）及合成前体（3-甲酰利福霉素SV）等杂质的控制至关重要。中国药典对有关物质测定提出了严格的系统适用性要求，异烟肼利福霉素腙（利福平与异烟肼在酸性条件下的降解产物）与利福平主峰之间的分离度应大于4.0。

本次实验采用Hypersil BDS C8（5 μm，4.6×250 mm）色谱柱，以甲醇-乙腈-磷酸二氢钾溶液-柠檬酸溶液为流动相（30 : 30 : 36 : 4，v/v，pH 7.01），在254 nm波长下进行检测，系统适应性溶液的色谱图如图1所示。

图1. 有关物质系统适用性色谱图（色谱峰，1-异烟肼，2-异烟肼利福霉素腙，3-杂质，4-利福平）

实验表明，异烟肼利福霉素腙与利福平的分离度达6.94（药典要求>4.0），利福平与相邻杂质分离度为3.53，完全满足药典要求。同时，如表1所示，利福平对照品及三种杂质的色谱峰均对称性好、柱效高，为杂质的准确定量奠定了坚实基础。各杂质与主峰的叠加色谱图（图2）进一步验证了出峰顺序及分离效果。图中的杂质1为醌式利福平，杂质2为N-氧化利福平，杂质3为3-甲酰利福霉素SV。其中与利福平相邻的杂质为3-甲酰利福霉素SV（杂质3）。

表1. 利福平中有关物质系统适用性色谱试验数据

图2. 各对照品与系统适用性溶液叠加色谱图

二、异烟肼与盐酸乙胺丁醇测定：两种色谱柱均获优异分离

异烟肼和盐酸乙胺丁醇均为极性较强的化合物，在常规C18柱上保留较弱，分离难度较大。中国药典要求混合对照品溶液中异烟肼峰与乙胺丁醇峰之间应达到基线分离。本次实验分别采用SinoPak BEH AQ-C18（5 μm，4.6×250 mm）和Supersil Premium C18（5 μm，4.6×250 mm）两款色谱柱进行评价。以醋酸铜-醋酸铵缓冲液（pH 5.0）-甲醇（94 : 6，v/v）为流动相，在270 nm波长下进行等度洗脱。结果见表2，色谱图见图3和图4。

实验结果表明，两款色谱柱均实现了异烟肼与乙胺丁醇的极佳分离（分离度分别达36.02和45.48），远超药典基本要求。其中，Supersil Premium C18 色谱柱在异烟肼和盐酸乙胺丁醇的分离中，柱效更高（理论塔板数更大）、峰形更对称（拖尾因子更接近1），且分离度更好（45.48 > 36.02），整体分析效果表现更为出色。

表2. 异烟肼与盐酸乙胺丁醇系统适用性测定结果对比

图3. SinoPak BEH AQ-C18色谱柱上的异烟肼与盐酸乙胺丁醇系统适用性色谱图

图4. Supersil Premium C18色谱柱上的异烟肼与盐酸乙胺丁醇系统适用性色谱图

三、结语

本次实验充分证明，依利特EClassical 3200L HPLC系统搭配Hypersil BDS C8、SinoPak BEH AQ-C18及Supersil Premium C18等色谱柱，完全能够满足《中国药典》乙胺利福异烟片中有关物质及含量测定的全部要求。无论是利福平降解杂质的精细分离，还是异烟肼与乙胺丁醇的高效分离，依利特解决方案均表现出高分离度、高柱效、高重复性的性能。