高效液相色谱仪是实验室的“宝贵资产”，价格昂贵，作用关键。一套维护得当的HPLC系统，不仅能保证实验数据的准确可靠，还能大幅延长使用寿命，为您省下可观的维修和耗材费用。今天，我们就来详细拆解一下HPLC的日常维护内容和必须牢记的注意事项。

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一、高效液相色谱仪每日维护怎么做？日常必做操作

仪器每天的开关机操作，是维护的关键环节，大部分故障隐患都来自日常操作疏漏。

1.1 流动相处理（过滤、脱气、水质要求）

流动相的好坏直接影响实验结果。配制水相尽量使用超纯水，不要直接用普通纯水，避免杂质、离子带入系统。所有流动相都需要用对应滤膜过滤，除去微小颗粒，防止堵塞管路和色谱柱。
配好的流动相需要超声脱气，在线脱气机只能做辅助，不能替代超声。配制好的水相流动相存放时间不宜过长，容易滋生细菌，用完及时处理，做好密封避光存放。

1.2 HPLC 泵系统维护：开机平衡、实验结束冲洗流程

开机后先观察管路有没有气泡，缓慢提升流速做系统平衡，留意压力变化。压力波动偏大，优先检查管路气泡以及单向阀是否被污染。

如果实验用到缓冲盐流动相，测试结束一定要先除盐冲洗：用 10% 甲醇‑水冲洗至少 30 分钟，把管路里面的盐冲洗干净，再换成高比例有机相保存系统。千万不要带着缓冲盐直接关机过夜，盐结晶会磨损泵密封垫，还会堵塞管路。
全部冲洗流程完成之后，再关闭仪器，不要实验做完直接断电。

1.3 自动进样器维护要点，避免交叉污染

自动进样器容易发生交叉污染、进样针堵塞、隔垫磨损漏液。每次实验前后，要对进样针、定量环做清洗。样品在上机之前，必须过滤，固体颗粒很容易造成进样针堵塞。
进样隔垫属于消耗件，老化之后会产生碎屑，出现漏液、压力异常，需要定期检查更换。废液管保持通畅，废液桶及时清理，防止废液倒灌污染设备。

1.4 色谱柱保护：加装保护柱、色谱柱保存方法

色谱柱采购成本高，日常保护到位可以显著延长使用寿命。条件允许的情况下，管路前端加装保护柱，拦截样品里的杂质，保护分析柱。
反相 C18 这类常用色谱柱，长期保存建议使用高比例甲醇或者乙腈，不要长时间用纯水保存反相柱。拆装色谱柱轻拿轻放，避免磕碰，简单记录每根柱子的使用情况、进样样品类型。

表1.HPLC 日常维护核心内容分类表

二、高效液相定期深度保养周期方案

只做每日开关机维护不够，按照使用频次做周期性检查保养，可以提前发现隐患，避免做样中途突发故障停机。

2.1 每周检查项目：泵头漏液、在线过滤器、检测器状态

每周简单巡检一遍设备，看泵头位置有没有轻微渗漏；观察在线过滤器，系统压力有明显升高时，及时清洗或者更换滤片。留意检测器基线噪声，查看氘灯使用时长；各个接头位置检查，接头松动会引入气泡，基线就会不停抖动。

2.2 3‑6 个月周期性更换配件：泵密封垫、氘灯寿命管理

泵密封垫属于易损耗部件，长期往复运行会磨损，出现压力不稳、漏液，一般 3‑6 个月根据实际使用频率更换。紫外检测器氘灯有固定寿命，临近寿命终点，基线噪声变大，检测灵敏度下降，要及时更换。
同时查看管路状态，老化发硬的管路及时换掉，防止后期漏液。

三、HPLC 操作重点注意事项，规避仪器损坏风险

仪器很多不可逆损伤，都是平时操作习惯不当造成，实验室操作人员需要留意下面这些要点。

3.1 缓冲盐流动相使用禁忌（盐析结晶问题）

缓冲盐在液相分析中使用很频繁，也是故障高发点。不要让含盐流动相直接切换高比例有机相，容易析出盐结晶堵管路。实验结束必须充分冲洗除盐，不能带盐关机保存。缓冲盐的 pH 值，要控制在色谱柱允许耐受区间，pH 过高或过低会破坏色谱柱固定相，直接损坏色谱柱。

3.2 HPLC 标准开机、关机操作顺序

开机：接通仪器电源，开启检测器，流动相就位，低流速启动泵，逐步调至实验流速，等待系统平衡后再进样。
关机：样品全部测试完成，执行冲洗除盐，流速降到 0，关闭泵，再关闭检测器。禁止高流速状态直接断电。

3.3 废液处理、安全防护与仪器维护记录要求

有机废液分类收集，贴好标识，按照实验室危废规范处理，不要随意倾倒。多人共用仪器，建议做好使用维护记录，记录开机时间、测试样品、压力情况、维护操作、配件更换、故障现象，后期出问题方便回溯排查。

表2.缓冲盐使用关键注意事项表

操作顺序要规范

开机顺序：先打开在线脱气机、检测器，再启动泵，后打开工作站软件，让系统压力平稳上升。

关机顺序：先停止采集数据，然后按上述“结束冲洗”流程彻底冲洗系统，再关泵、关检测器，后关闭软件和电源。

表3.HPLC 标准操作流程表

四、高效液相色谱仪常见故障

做实验遇到异常情况，可以自行先做基础排查，减少设备停机时间。

4.1 泵压力突然过高是什么原因？怎么处理？

压力突然升高，大多是流动相未过滤、保护柱或者色谱柱堵塞、在线过滤器污染、单向阀异常。可以断开色谱柱接上二通，分段测试压力，定位堵塞位置，再清洗或者更换对应配件。

4.2 基线波动大、基线跳舞，排除气泡如何解决？

基线不停跳动，先排除管路气泡；再看氘灯使用时长，老化就更换氘灯；清洗检测器流通池；做完以上操作问题依旧，联系厂家工程师检修。

4.3 进样不出峰，从进样器‑色谱柱‑检测器三步排查

样品进样之后没有出峰，分三步排查：第一检查进样系统，看进样针、隔垫有没有漏液；第二核对色谱柱型号，判断柱效是否衰减；第三确认检测器已经开启，波长、信号设置正确。

五、HPLC 仪器维护日志记录哪些内容？附记录表模板

仪器维护日志建议记录：仪器编号、操作日期、操作人员、流动相配比、测试样品、工作压力区间、基线状态、维护操作、配件更换记录、故障现象以及处理结果。
共用仪器的实验室，坚持填写维护日志，出现故障不用反复试错，可以快速定位问题。

表4.维护记录核心要素表

HPLC维护日志表

HPLC维护常见问题

Q1：开机后泵压力突然过高，可能原因是什么？如何处理？

A：主要原因包括流动相未充分过滤导致管路堵塞、色谱柱污染或保护柱堵塞、单向阀故障。处理方法：先检查在线过滤器，若变脏则清洗或更换筛板；若过滤器正常，断开色谱柱，用二通管连接，若压力恢复正常则需冲洗或更换色谱柱/保护柱；仍异常则拆解清洗单向阀。

Q2：基线持续“跳舞”（波动大），排除气泡问题后还有哪些解决办法？

A：可能是氘灯老化（查看使用时长）、流通池污染或检测器电路故障。解决步骤：先更换新氘灯测试；若无效，用甲醇-水（1:1）混合液冲洗流通池；仍异常则联系工程师检查检测器电路。

Q3：进样后无色谱峰出现，该从哪些方面排查？

A：分三步排查：1. 进样系统：检查进样针是否堵塞、进样口隔垫是否漏液，确保样品正常进入系统；2. 色谱柱：确认色谱柱与流动相匹配，若柱效过低需更换；3. 检测器：检查检测器是否开启、信号是否正常传输，重启检测器及工作站尝试恢复。

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